Las tendencias actuales para el análisis del contenido de cannabinoides en los extractos / concentrados de flores de cannabis y los alimentos enriquecidos disponibles comercialmente dependen de la cromatografía líquida para las pruebas de potencia y / o para garantizar la precisión de las afirmaciones en las etiquetas en las descripciones del contenido del producto.
Luego, este trabajo describe un método cromatográfico rápido para el análisis de 16 cannabinoides comúnmente monitoreados en laboratorios centrados en el cannabis. Sus estructuras se muestran en la Figura 1.
Figura 1. Estructuras químicas de los dieciséis cannabinoides analizados en este estudio.
Hardware software
Para la separación cromatográfica, se utilizó un sistema HPLC PerkinElmer Flexar ™ con un detector PDA (matriz de fotodiodos) Plus. El control del instrumento, el análisis y el procesamiento de datos se realizaron utilizando la plataforma de software Chromera®.
Parámetros del método
Los parámetros de LC se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1. Parámetros LC.
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Columna:
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PerkinElmer SPP C18, 2,7 μm, 150 x 3,0 mm
(Parte # N9308411)
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Fase móvil:
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- Disolvente A: agua con fórmico al 0,1% y formiato de amonio 5 mM
- Disolvente B: acetonitrilo con fórmico al 0,1%
- Programa de disolventes:
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Paso
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Tiempo
(min.)
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Tasa de flujo
(ml / min)
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%A
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%B
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Equil.:
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4.5
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1.0
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33
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67
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1
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6
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1.0
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5
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95
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2
|
2
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1.0
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5
|
95
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Tiempo de análisis:
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6min.
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Tasa de recopilación de datos: 5 pts / seg (Hz)
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Presión:
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4400 psi / 300
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barra máxima
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Longitudes de onda de PDA:
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28 nm
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Celda de flujo PDA: 10 mm (estándar)
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Temperatura del horno:
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40 ºC
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Volumen de inyección:
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10 μL
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Disolventes, estándares y muestras Todos los disolventes y diluyentes utilizados fueron de calidad HPLC. A menos que se especifique lo contrario, se prepararon diluciones estándar y de extracto de muestra usando metanol / agua 80:20.
Los dieciséis estándares de cannabinoides de 1 mg / ml se obtuvieron de Sigma-Aldrich®, Inc (Allentown, PA). Estos incluyeron: Δ9-tetrahidrocannabinol (Δ9-THC), ácido Δ9-tetrahidrocannabinólico (THCA-A), Δ8-tetrahidrocannabinol (Δ8-THC), tetrahidrocannabivarina (THCV), cannabidivarina (CBDV), ácido cannabidivarínico (CBDVA), ácido cannabidivarínico (CBDVA).), ácido cannabidiólico (CBDA), cannabigerol (CBG), ácido cannabigerólico (CBGA), cannabinol (CBN), cannabicromeno (CBC), cannabiciclol (CBL), ácido cannabicroménico (CBCA), ácido cannabinólico (CBNA) y ácido tetrahidrocannabivarico (THCVA)).
Se preparó una solución madre de mezcla estándar de 50 ppm agregando todo el contenido de cada estándar en un matraz aforado de 20 ml y llenándolo hasta la marca con agua. Esto también sirvió como estándar de calibración L10.
Se prepararon calibrantes adicionales diluyendo en serie la mezcla estándar a niveles de concentración de 25, 10, 5, 2.5, 1.0, 0.5, 0.25, 0.10 y 0.05 μg / mL (ppm), proporcionando un conjunto de calibración de 10 niveles. Dependiendo de la respuesta, el nivel más bajo (0.05 μg / mL) no se utilizó para algunos analitos.
Resultados y discusión
El cromatograma del estándar de 50 μg / mL se muestra en la Figura 2, con los 16 cannabinoides eluyendo en menos de cinco minutos.
En la Figura 3 se muestra una superposición cromatográfica de 10 réplicas del estándar de cannabinoides de 10 μg / ml, que destaca una muy buena repetibilidad.
Las gráficas de linealidad para tres cannabinoides representativos se muestran en la Figura 4. Los valores R2 para los 16 cannabinoides estaban por encima de 0,999.
El cromatograma del estándar de cannabinoides de bajo nivel de 0,1 μg / ml se muestra en la Figura 5.
El cromatograma de una inyección de blanco de agua / metanol 80:20 se muestra en la Figura 6, ejecutado justo después del conjunto de calibrante de alto nivel, sin mostrar ningún arrastre ni interferencias.
Figura 2. Cromatograma del estándar cannabinoide de 50 μg / mL
Figura 3. Superposición cromatográfica de las inyecciones de 10 réplicas del estándar de cannabinoides de 10 μg / ml
Figura 4. Gráficos de linealidad para tres cannabinoides de ejemplo.
Figura 5. Cromatograma del estándar cannabinoide de 0,1 μg – ml
Figura 6. Cromatograma de una inyección de diluyente en blanco
Como se enumera en la Tabla 2, los niveles de LOQ (límite de cuantificación) se establecieron para cada analito, según la respuesta promedio para el estándar de calibración de 0.1 μg / mL, procesado por triplicado.
Conclusiones
- Este trabajo ha demostrado la rápida y robusta separación cromatográfica y cuantificación de 16 cannabinoides comúnmente analizados en laboratorios centrados en cannabis, utilizando el sistema de HPLC PerkinElmer Flexar con un detector PDA.
- El método proporciona una muy buena repetibilidad cromatográfica y ofrece LOQ de ≤ 0,1 μg / ml para la mayoría de los analitos.
- Si es necesario, se puede obtener sensibilidad adicional utilizando la celda de flujo de 50 mm opcional del PDA.
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Analito
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LOQ calculado (μg / mL; S / N = 10)
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Analito
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LOQ calculado (μg / mL; S / N = 10)
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CBDV
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0.05
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CBC
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0.05
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CBDVA
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0.03
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CBCA
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0.11
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CBG
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0.10
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CBL
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0.08
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CBGA
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0.04
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Δ9-THC
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0.09
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CBD
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0.07
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Δ8-THC
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0.11
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CBDA
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0.03
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THCA-A
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0.12
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CBN
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0.04
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THCV
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0.08
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CBNA
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0.07
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THCVA
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0.05
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